·         CELLVATION CRYOPRESERVATION MEDIUM 无血清，无DMSO低温冻存培养基

无血清，无DMSO低温冻存培养基

CELLVATION™ CRYOPRESERVATION MEDIUM

（CellVation —无血清冻存培养基）

描 述：

Mpbio公司的Cellvation™ 是一款非常独特的细胞冻存培养基，不含有DMSO或血清，专门设计用于无血清培养细胞的冻存，已成功用于超过50种细胞的冻存/复苏实验，涵盖原代细胞、有限细胞，悬浮细胞及贴壁细胞。除此之外，cellvation™也是所有血清依赖性培养细胞冻存的理想选择。

优 点：

* 不需血清，不需DMSO，不需细胞培养基，只需按1 x 10⁶ - 1 x 10⁷ cells/ml的浓度加入相应体积的cellvation即可实现细胞的冻存；

* 不含血清，适用于无血清生长细胞的冻存/解冻实验，也适用于血清依赖性细胞的冻存；

* 不含DMSO，避免出现由DMSO引起的细胞毒性或形态分化现象；

* 最佳复苏率与更快的细胞贴壁速度；

* 1X浓度培养基，不需稀释，即用型。

* 一系列记录显示已成功用于50多种细胞的冻存：细胞系或原代细胞。
应 用 实例：

实 验 步 骤：

√ 冻 存（使用前混合均匀，不需稀释）

（1） 检测细胞培养物：是否含污染物、是否健康生长、生长密度等

（2） 若冻存贴壁细胞， 37℃，0.25%胰酶消化细胞1-3min；

注：一些生长在无血清培养基的细胞系可能对0.25%胰酶敏感，此时需用更少的胰酶或添加胰酶抑制剂；

（3） 细胞计数，确定活细胞总量。细胞活力需高于80%且细胞需处于对数期后期或生长汇合前期；

（4） 细胞悬液600-800rpms离心10min，去除上清。保留3-5ml用来做无菌检测（如硫乙醇酸盐培养基、脑心浸液培养基等）和支原体检测。

（5） 适当体积的cellvation™ 轻轻重悬细胞，使用浓度为1 x 10⁶ - 1 x 10⁷ cells/ml.一些细胞种类如杂交瘤或骨髓瘤需要增加细胞密度。

（6） 分装细胞悬液于塑料或玻璃冻存管内，每管约1-2ml；

（7） 密封管子，室温储存20-30min，期间偶尔轻轻摇动，使细胞完全与冻存液接触；

（8） 将冻存管放在一绝缘容器内，于 -20℃冻存1 hour。将冻存管取出，转到-70℃冰箱放置1 hour（至关重要的一步，放到-70℃的时间不要超过2 hours），之后将瓶子转到放到液氮气相部分，冻存24 hours后再转至液氮。对大多数细胞最佳的冷冻率1℃/min；

√ 细 胞 复 苏

（1）从液氮中取出细胞冻存瓶，37℃水浴快速解冻细胞；

（2）70%乙醇插拭瓶子表面；

（3）将细胞转入培养瓶内，轻轻加入合适体积的生长培养基（2-5 ml）；

（4） 37℃细胞复苏至少2h后开始计数（如台盼蓝染料排除法）；

（5）细胞贴壁后再更换新培养基，对于悬浮细胞则24 hours后换液。

若有必要，按以下方式清洗去除cellvation™：

（1）转移细胞到15ml离心管内，轻轻加入2-3ml完全生长培养基（解冻后的培养基更脆弱）；

（2）400 - 600 rpms离心约5-6min；

（3）轻轻倒出上清，适当体积生长培养基重悬细胞，然后转入培养瓶内；

（4）复苏至少2h后开始计数；

！特别重要：终止细胞培养前，建议对细胞做一个全面的冻存/解冻循环实验从而确保无菌培养及细胞的活力正常。

产 品 信 息： 4℃-8℃保存，有效期至少1年。

其 他 相 关 产 品：室温保存，可替代sigma公司的D2650。